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纖維素酶反應和一般酶反應不一樣，其最主要的區別在於纖維素酶是多組分酶係，且底物結構極其複雜。由於底物的水不溶性，纖維素酶的吸附作用代替了酶與底物形成的ES複合物過程。纖維素酶先特異性地吸附在底物纖維素上，然後在幾種組分的協同作用下將纖維素分解成葡萄糖。

1950年，Reese等提出了C1-Cx假說，該假說認為必須以不同的酶協同作用，才能將纖維素徹底的水解為葡萄糖。協同作用一般認為是(C1酶)首先進攻纖維素的非結晶區，形成Cx所需的新的遊離末端，然後由CX酶從多糖鏈的還原端或非還原端切下纖維二糖單位，最後由β-葡聚糖苷酶將纖維二糖水解成二個葡萄糖。不過，纖維素酶的協同作用順序不是絕對的，隨後的研究中發現，C1-Cx和β-葡聚糖苷酶必須同時存在才能水解天然纖維素。若先用C1酶作用結晶纖維素，然後除掉C1酶，再加入Cx酶，如此順序作用卻不能將結晶纖維素水解。

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