一、實驗目的
   以所篩選出的芽孢杆菌為實驗菌株，通過種子擴大培養，選出生長力旺盛的菌株進行液體搖瓶發酵。通過測定不同發酵時間生產的酶活，來初步估計發酵最佳時期和終點。通過本實驗要掌握測定酶活的方法。
二、實驗原理
澱粉酶是能夠分解澱粉糖苷鍵的一類酶的總稱，包括α-澱粉酶、β-澱粉酶、糖化酶和異澱粉酶。芽孢杆菌主要用來產生α-澱粉酶和異澱粉酶，其中α-澱粉酶又稱澱粉1，4-糊精酶，能夠切開澱粉鏈內部的α-1，4-糖苷鍵，將澱粉水解為麥芽糖、含有6 個葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖與DNS試劑共熱呈陽性反應，產生紅棕色；而異澱粉酶又稱澱粉α-1，6-葡萄糖苷酶、分枝酶，此酶作用於支鏈澱粉分子分枝點處的α-1，6-糖苷鍵，將支鏈澱粉的整個側鏈切下變成直鏈澱粉。通過發酵實驗，AG電子遊戲平台可以以酶活為依據，初步估計發酵的最佳時期和發酵終點。
   酶活力也稱酶活性，是以酶在最適溫度、最適pH等條件下，催化一定的化學反應的初速度來表示。本實驗是以一定量的澱粉酶液，於37°C、pH6.8的條件下，在一定的初始作用時間裏將澱粉轉化為還原糖，然後通過與DNS試劑作用，比色測定，求得還原糖的生成量，從而計算出酶反應的初速度，即酶的活力。這裏規定，一個澱粉酶活力單位定義為在37°C、pH6.8的條件下，每分鍾水解澱粉生成1mg還原糖所需的酶量。
三、 實驗材料及設備
1、篩選出來的產澱粉酶芽孢杆菌。
2、菌種：從商丘師院土壤中分離出的產澱粉酶的芽孢杆菌
3、種子培養基：蛋白腖1 % ,酵母浸出物0. 5 % ,氯化鈉1 % , pH自然
4、發酵培養基：按正交試驗所選的最佳方案來配置
5、儀器：控溫搖床、高壓蒸汽滅菌鍋、電子天平、分光光度計、燒杯、玻璃棒、錐形瓶、離心機、刻度試管： 25mL×4、容 量 瓶： 100mL×1、燒   杯：  250mL×1、滴 管 2支、洗耳球2支、洗瓶、試管架、移液管架、移液管、玻棒：各1支
四、 試劑的配製
1、培養基的配製
按上述配方稱量、溶解、滅菌
澱粉溶液（0.5%）
稱取5g可溶性澱粉，溶於1000mL熱水中。（臨用前配製）
蔗糖溶液（1%）
3、 3,5-二硝基水楊酸試劑（DNS試劑）
將5.0g 3,5-二硝基水楊酸溶於200mL 2N NaOH溶液中（不適宜用高溫促溶），接著加入500mL含130g酒石酸鉀鈉的溶液，混勻。再加入5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解後，定容至1000mL。暗處保存備用。
4、 磷酸緩衝液（0.2mol/L，pH6.8）
5、 NaOH溶液（6mol/L）
6、 NaCl溶液（0.3%）
五、 操作步驟     
澱粉酶的製備
(1)菌的培養
菌種活化：將保存的菌種轉接到斜麵培養基,37 ℃培養24 h ,備用。
種子液的製備：取一環活化的菌種,接入裝量為50 mL 種子培養基的250 mL 三角瓶中,37 ℃,180 r/ min 培養18 h。
搖瓶培養：分別取1 mL 種子液,接入盛有50 mL發酵培養基的200 mL三角瓶中(接種量為2 % ,V/ V) 。置搖床中,30 ℃振蕩培養24 h ,轉速為160 r/ min
（2）酶的提取：液體培養基在3000r/min的離心機中離心10min，取上清；
2、澱粉酶活力的測定
     取25mL刻度試管4支，按下表編號並操作，記錄實驗結果。

六、 結果處理
    根據上表的實驗結果，以蔗糖濃度為橫坐標，光密度值為縱坐標繪製出標準曲線。
α-澱粉酶活性由下式求得：
A=（500×f/m）×〔100/（100-h）〕×（lgD1-lgD2）/（t1-t2）
=500×f·b/m）×〔100/（100-h） 〕
式中：
A──α-澱粉酶活性；
m── 100mL氯化鈣提取的試樣質量，g；
h── 試樣中水分含量，％；
f── 酶提取液的稀釋倍數；
t1、t2── 不同的反應時間，min；
D1、D2── 時間t1、t2時的吸光度；
b── lgD對t的曲線的斜率的絕對值；
500──係數。