• 列表
  • 王靜說:。我和黃勝義與周星馳和好朋友沒什麽共同之處。
  • 她宣布龍“初戀”,但一次長期逗留,現在嫁給了一位黑人居民
  • 奇聞:新娘擺怪異姿勢拍照,旁邊有隻腳不老實,成片後發現大問題
  • 元旦這麽穿!“00後跨年穿搭”初中生看傻眼!高中生表示拜服!
  • 人生你可以不富,但你一定要快樂
  • 最後三星手機售罄!三星A60 RMB版的性價比
  • 中日軍艦相繼訪問斯裏蘭卡 日本或爭奪印度洋影響力
  • 在五分鍾內一分鍾!香波特不香。你不確定冠軍冠軍嗎?
  • 英雄聯盟:通往劍聖受傷的道路,黑暗的收獲足夠強大,沒有天空。烏迪爾深陷其中。
  • NBA現役出道即巔峰的5位球員,格裏芬上榜,第一是史上第一人
  • 您好,歡迎光臨廣州AG電子遊戲平台有限公司!
    13928911110 13710611110
    高級搜索:

    聯係AG電子遊戲平台Customers

    廣州AG電子遊戲平台有限公司

    聯係人:林小姐

    手機:13710611110

    電話:020-32143655

    傳真:020-82792079

    E-mail:77207767@qq.com

    地址:廣州市增城區新塘鎮黃沙頭村7號中銘產業園C棟101/201

    澱粉酶活力測定,AG電子遊戲平台

    來源: 時間:2017-05-16 16:28:04 次數:

    一、實驗目的
       以所篩選出的芽孢杆菌為實驗菌株,通過種子擴大培養,選出生長力旺盛的菌株進行液體搖瓶發酵。通過測定不同發酵時間生產的酶活,來初步估計發酵最佳時期和終點。通過本實驗要掌握測定酶活的方法。
    二、實驗原理
    澱粉酶是能夠分解澱粉糖苷鍵的一類酶的總稱,包括α-澱粉酶、β-澱粉酶、糖化酶和異澱粉酶。芽孢杆菌主要用來產生α-澱粉酶和異澱粉酶,其中α-澱粉酶又稱澱粉1,4-糊精酶,能夠切開澱粉鏈內部的α-1,4-糖苷鍵,將澱粉水解為麥芽糖、含有6 個葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖與DNS試劑共熱呈陽性反應,產生紅棕色;而異澱粉酶又稱澱粉α-1,6-葡萄糖苷酶、分枝酶,此酶作用於支鏈澱粉分子分枝點處的α-1,6-糖苷鍵,將支鏈澱粉的整個側鏈切下變成直鏈澱粉。通過發酵實驗,AG電子遊戲平台可以以酶活為依據,初步估計發酵的最佳時期和發酵終點。
       酶活力也稱酶活性,是以酶在最適溫度、最適pH等條件下,催化一定的化學反應的初速度來表示。本實驗是以一定量的澱粉酶液,於37°C、pH6.8的條件下,在一定的初始作用時間裏將澱粉轉化為還原糖,然後通過與DNS試劑作用,比色測定,求得還原糖的生成量,從而計算出酶反應的初速度,即酶的活力。這裏規定,一個澱粉酶活力單位定義為在37°C、pH6.8的條件下,每分鍾水解澱粉生成1mg還原糖所需的酶量。
三、 實驗材料及設備
1、篩選出來的產澱粉酶芽孢杆菌。
    2、菌種:從商丘師院土壤中分離出的產澱粉酶的芽孢杆菌
    3、種子培養基:蛋白腖1 % ,酵母浸出物0. 5 % ,氯化鈉1 % , pH自然
    4、發酵培養基:按正交試驗所選的最佳方案來配置
    5、儀器:控溫搖床、高壓蒸汽滅菌鍋、電子天平、分光光度計、燒杯、玻璃棒、錐形瓶、離心機、刻度試管: 25mL×4、容 量 瓶: 100mL×1、燒   杯:  250mL×1、滴 管 2支、洗耳球2支、洗瓶、試管架、移液管架、移液管、玻棒:各1支
四、 試劑的配製
1、培養基的配製
    按上述配方稱量、溶解、滅菌
    澱粉溶液(0.5%)
稱取5g可溶性澱粉,溶於1000mL熱水中。(臨用前配製)
蔗糖溶液(1%)
3、 3,5-二硝基水楊酸試劑(DNS試劑)
將5.0g 3,5-二硝基水楊酸溶於200mL 2N NaOH溶液中(不適宜用高溫促溶),接著加入500mL含130g酒石酸鉀鈉的溶液,混勻。再加入5g結晶酚和5g亞硫酸鈉,攪拌溶解後,定容至1000mL。暗處保存備用。
4、 磷酸緩衝液(0.2mol/L,pH6.8)
5、 NaOH溶液(6mol/L)
6、 NaCl溶液(0.3%)
五、 操作步驟     
    澱粉酶的製備
(1)菌的培養
    菌種活化:將保存的菌種轉接到斜麵培養基,37 ℃培養24 h ,備用。
    種子液的製備:取一環活化的菌種,接入裝量為50 mL 種子培養基的250 mL 三角瓶中,37 ℃,180 r/ min 培養18 h。
    搖瓶培養:分別取1 mL 種子液,接入盛有50 mL發酵培養基的200 mL三角瓶中(接種量為2 % ,V/ V) 。置搖床中,30 ℃振蕩培養24 h ,轉速為160 r/ min
    (2)酶的提取:液體培養基在3000r/min的離心機中離心10min,取上清;
2、澱粉酶活力的測定
     取25mL刻度試管4支,按下表編號並操作,記錄實驗結果。

    六、 結果處理
    根據上表的實驗結果,以蔗糖濃度為橫坐標,光密度值為縱坐標繪製出標準曲線。
    α-澱粉酶活性由下式求得:
    A=(500×f/m)×〔100/(100-h)〕×(lgD1-lgD2)/(t1-t2)
    =500×f·b/m)×〔100/(100-h) 〕
    式中:
    A──α-澱粉酶活性;
    m── 100mL氯化鈣提取的試樣質量,g;
    h── 試樣中水分含量,%;
    f── 酶提取液的稀釋倍數;
    t1、t2── 不同的反應時間,min;
    D1、D2── 時間t1、t2時的吸光度;
    b── lgD對t的曲線的斜率的絕對值;
    500──係數。
    關鍵字: 
    版權所有©2014 廣州AG電子遊戲平台有限公司  備案號:粵ICP備16070894號
    地址:廣州市增城區新塘鎮黃沙頭村7號中銘產業園C棟101/201   郵編:511340
    電話:020-32143655   傳真:020-82792079   郵箱:77207767@qq.com   技術支持:天助網
    廣州AG電子遊戲平台有限公司

    點擊這裏給我發消息

    網站地圖